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求助：为什么同样的引物和质粒，用KOD酶和Taq酶PCR结果会不一样

保真酶那么多，换一种啊。。。pfu，pyrobest。。。

ULYSSEESWB 2016-08-08

可以换家公司的pfu或者kod 试试 www.aidlab.cn

maozhang 2016-08-11

www.tolobio.com

tolobio 2016-08-07

展开引用ohoho26 新手求助：为什么同样的引物和质粒，用KOD酶和Taq酶PCR结果会不一样？我要从9311bp的质粒里PCR出486bp的片段，先用Taq酶摸索温度等条件后，目的条带500bp左右，用KOD酶PCR产生条带却2500bp左右，并且两种酶均只产生一条条带；用KOD酶重新做温度梯度PCR，产生2500bp的条带；实验重复了5次均是同样的结果；我再次用同样的引物和质粒，用Taq酶做PCR却是500bp的正确大小的目的条带。这是为什么呢？实验室其他师兄师姐也没遇到过此类情况，特此请教各位前辈。因为之后我要用这486bp的片段与其他基因做融合PCR，所以要用KOD酶。如果各位前辈有好的方法，希望不吝赐教，谢谢大家。......两种酶的特性是不一样的，一般来讲，保真性越高，效率会越低，所以KOD扩不出来也很正常了。KOD比较老了，现在市面上很多高保真酶都兼顾了保真性和扩增效率，可以换一下试试，如takara的PrimeSTAR Max，用的还不错。500很短，大多数都能满足。

civcul 2016-08-13

会不会kod的酶或者buffer污染了，做个阴性对照试试？或者跟楼上说的一样，你换种酶，说不定问题就解决了。如果这的想搞明白，就把2500的片段测个续，看看是啥

merlinqi 2016-08-14

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